色谱基础知识

舞长安

[有点长，分三次发]

气相色谱的分离原理为何？
答：气相色谱是一种物理的分离方法。利用被测物质各组分在不同两相间分配系数（溶解度）的微小差异，当两相作相对运动时，这些物质在两相间进行反复多次的分配，使原来只有微小的性质差异产生很大的效果，而使不同组分得到分离。

何谓气相色谱？它分几类？
答：凡是以气相作为流动相的色谱技术，通称为气相色谱。一般可按以下几方面分类：
1. 按固定相聚集态分类：

1.1 气固色谱：固定相是固体吸附剂，
1.2 气液色谱：固定相是涂在担体表面的液体。
2.按过程物理化学原理分类：
2.1 吸附色谱：利用固体吸附表面对不同组分物理吸附性能的差异达到分离的色谱。

2.2 分配色谱：利用不同的组分在两相中有不同的分配系数以达到分离的色谱。

2.3 其它：利用离子交换原理的离子交换色谱：利用胶体的电动效应建立的电色谱；利用温度变化发展而来的热色谱等等。

3.按固定相类型分类：
3.1 柱色谱：固定相装于色谱柱内，填充柱、空心柱、毛细管柱均属此类。
3.2 纸色谱：以滤纸为载体，
3.3 薄膜色谱：固定相为粉末压成的薄漠。
3.4 按动力学过程原理分类：可分为冲洗法，取代法及迎头法三种。

气相色谱法简单分析装置流程是什么？
答：气相色谱法简单分析装置流程基本由四个部份组成：
1.气源部分；2.进样装置；3.色谱柱；4.鉴定器和记录器
  
气相色谱法的一些常用术语及基本概念解释？
答：

1. 相、固定相和流动相：一个体系中的某一均匀部分称为相；在色谱分离过程中，固定不动的一相称为固定相；通过或沿着固定相移动的流体称为流动相。

2. 色谱峰：物质通过色谱柱进到鉴定器后，记录器上出现的一个个曲线称为色谱峰。
3. 基线：在色谱操作条件下，没有被测组分通过鉴定器时，记录器所记录的检测器噪声随时间变化图线称为基线。
4. 峰高与半峰宽：由色谱峰的浓度极大点向时间座标引垂线与基线相交点间的高度称为峰高，一般以h表示。色谱峰高一半处的宽为半峰宽，一般以 x1/2表示。
5. 峰面积：流出曲线（色谱峰）与基线构成之面积称峰面积，用Ａ表示。
6. 死时间、保留时间及校正保留时间：从进样到惰性气体峰出现极大值的时间称为死时间，以td表示。从进样到出现色谱峰最高值所需的时间称保留时间，以tr表示。保留时间与死时间之差称校正保留时间。以Vd表示。
7. 死体积，保留体积与校正保留体积：死时间与载气平均流速的乘积称为死体积，以Vd表示，载气平均流速以Fc表示，Vd=tdxFc。保留时间与载气平均流速的乘积称保留体积，以Ｖr表示，Vr=trxFc
8. 保留值与相对保留值：保留值是表示试样中各组分在色谱柱中的停留时间的数值，通常用时间或用将组分带出色谱柱所需载气的体积来表示。以一种物质作为标准，而求出其他物质的保留值对此标准物的比值，称为相对保留值。
9. 仪器噪音：基线的不稳定程度称噪音。
10.基流：氢焰色谱，在没有进样时，仪器本身存在的基始电流（底电流），简称基流
   
一般选择载气的依据是什么？气相色谱常用的载气有哪些？
答：作为气相色谱载气的气体，要求要化学稳定性好；纯度高；价格便宜并易取得；能适合于所用的检测器。

常用的载气有氢气、氮气、氩气、氦气、二氧化碳气等等。

载气为什么要净化？应如何净化？
答：所谓净化，就是除去载气中的一些有机物、微量氧，水分等杂质，以提高载气的纯度。不纯净的气体作载气，可导致柱失效，样品变化，氢焰色谱可导致基流噪音增大，热导色谱可导致鉴定器线性变劣等，所以载气必须经过净化。

一般均采用化学处理的方法除氧，如用活性铜除氧；采用分子筛、活性碳等吸附剂除有机杂质；采用矽胶，分子筛等吸附剂除水分。

试样的进样方法有哪些？
答：色谱分离要求在最短的时间内，以“塞子”形式打进一定量的试样，进样方法可分为：
1. 气体试样：大致进样方法有四种：
1.1 注射器进样

1.2 量管进样

1.3 定体积进样

1.4 气体自动进样。
一般常用注射器进样及气体自动进样。注射器进样的优点是使用灵活，方法简便，但进样量重复性较差。

气体自动进样是用定量阀进样，重复性好，且可自动操作。

2. 液体试样：一般用微量注射器进样，方法简便，进样迅速。也可采用定量自动进样，此法进行重复性良好。
3. 固体试样：通常用溶剂将试样溶解，然后采用和液体进样同样方法进样。也有用固体进样器进样的。

舞长安

简述在气相色谱分析中柱长、柱内径、柱温、载气流速、固定相、进样等操作条件对分离的影响？
答：操作条件对于色谱分离有很大影响。
1. 柱长，柱内径：一般讲，柱管增长，可改善分离能力，短则组分馏出的快些；柱内径小分离效果好，柱内径大处理量大，但柱内径过大，将导致担体不能均匀地分布在色谱柱中。分析用柱管一般内径为3-6mm，柱长为1-4m。

2. 柱温：是一个重要的操作变数，直接影响分离效能和分析速度。选择柱温的根据是混合物的沸点范围，固定液的配比和鉴定器的灵敏度。提高柱温可缩短分析时间；降低柱温可使色谱柱选择性增大，有利于组分的分离和色谱柱稳定性提高，柱寿命延长。一般采用等于或高于数十度于样品的平均沸点的柱温为较合适，对易挥发样用低柱温，不易挥发的样品采用高柱温。
3. 载气流速：载气流速是决定色谱分离的重要原因之一。一般讲流速高色谱峰狭，反之则宽些，但流速过高或过低对分离都有不利的影响。流速要求要平稳，常用的流速范围每分钟在10-100ml之间。
4. 固定相：固定相是由固体吸附剂或涂有固定液的担体构成。
4.1 固体吸附剂或担体粗细：一般采用40-60目、60-80目、80-100目。当用同等长度的柱子，颗粒细的分离效率就要比粗的好些。
4.2 固定液含量：固定液含量对分离效率的影响很大，它与担体的重量比一般用15%-25%。比例过大有损于分离，比例过小会使色谱峰拖尾。
5. 进样：一般讲进样快，进样量小，进样温度高其分离效果好。对进液体样，速度要快，汽化温度要高于样品中高沸点组分的沸点值，一次汽化，保证色谱峰形不致展宽、使柱效高。当进样量在一定限度时，色谱峰的半峰宽是不变的。若进样量过多就会造成色谱柱超载。一般讲柱长增加四倍，样品的许可量增加一倍。对于常规分析，液体进样量为1-20微升；气体进样量为0.1-5毫升。

色谱柱管材料应根据什么原则选择？常用的柱管是由什么材质制成的？
答：对色谱柱管材质，应按如下要求选择：
1. 应与固定相、试样、载气不起化学反应。
2. 要易于加工成型。
3. 管内壁应光滑，横截面应均匀呈圆形。一般色谱柱管形状呈U型或螺旋形，大多由铜、不锈钢，玻璃等材质制成。

新的色谱柱管（铜或不锈钢管）应怎样处理后方能使用？
答：新柱管应先用稀酸或稀碱（1:1盐酸或氢氧化钠）洗涤，以除去油污等脏垢，而后用自来水冲洗,继而用蒸馏水冲洗至中性，再用干净的空气吹洗并烘干后，即可使用了。

舞长安

什么叫担体？对担体有哪些要求？
答：担体是一种多孔性化学惰性固体，在气相色谱中用来支撑固定液。对担体有如下几点要求：
1. 表面积较大，一般应在0.5-2m/g之间；
2. 具有化学惰性和热稳定性；
3. 有一定的机械强度，使涂渍和填充过程不引起粉碎；
4. 有适当的孔隙结构，利于两相间快速传质；
5. 能制成均匀的球状颗粒，利于气相渗透和填充均匀性好；
6. 有很好的浸润性，便于固定液的均匀分布。完全满足上述要求的担体是困难的，人们在实践中只能找出性能比较优良的担体。

担体分几类？其特点如何？
答：通常分为硅藻土和非硅藻土两大类，每一类又有种种小类。
1. 硅藻土类型：

1.1 白色的：表面积小，疏松，质脆，吸附性能小，经适当处理，可分析强极性组分；
1.2 红色的：有较大的表面积和较好的机械强度，但吸附性较大。
2. 非硅藻土类型：
2.1 氟担体：表面惰性好，可用来分析高极性和腐蚀性物质，但装柱不易，柱效率低些。
2.2 玻璃微球：表面积小，用它做担体柱温可以大大降低，而分离完全且快速。但涂渍困难，柱效低。
2.3 多孔性高聚物小球：机械强度高，热稳定性好，吸附性低，耐腐蚀，分离效率高，是一种性能优良的新型色谱固定相。
2.4 炭分子筛：中性，表面积大，强度高，祛寿命长，在微量分析上有无比的优越性。
2.5 活性炭：可以单独做为固定相。
2.6 沙：主要用于分离金属。

使用担体为何要进行处理？一般处理的方法有哪些？
答：常用的担体表面并非惰性，它具有不同程度的催化作用和吸附性（特别是固定液含量低时和分离极性物质时）造成峰拖尾和柱效下降，保留值改变等影响，因而需要预处理。现将一般处理方法简述如下：
1. 酸洗法：用浓盐酸加热处理担体20-30分钟，然后用自来水冲洗至中性，再用甲醇漂洗，烘干备用。此法主要除去担体表面的铁等无机物杂质。
2. 碱洗法：用10%的氢氧化钠或5%的氢氧化钾－甲醇溶液浸泡或回流担体，然后用水冲洗至中性，再用甲醇漂洗，烘干备用。碱洗的目的是除去表面的三氧化二铝等酸性作用点，但往往在表面上残留微量的游离碱，它能分解或吸附一些非碱性物质，使用时要注意。
3. 硅烷化：用硅烷化试剂和担体表面的硅醇、硅醚基团起反应，除去表面的氢键结合能力，可以改进担体的性能。常用的硅烷化试剂有二甲基二氯硅烷和六甲基二硅胺。
4. 釉化：把欲处理的担体在2.3%的碳酸钠－碳酸钾（1:1）水溶液中浸泡一天，烘干后先在870℃下煅烧3.5小时，然后升温到980℃煅烧约40分钟。经过这样处理，担体表面形成一层玻璃化的釉质，故称“釉化担体”。这种担体的吸附性能小，强度大，当固定液中加入少量的去尾剂后，能分析如醇、酸等极性较强的物质。但对非极性物质柱效能则稍有下降。此外甲醇和甲酸等物质在釉化担体上有一定的不可逆化学吸附，在定量分析时应予以注意。
5. 其他纯化方法：凡是用化学反应来除去活性作用点或用物理复盖以达到纯化担体表面性质的方法都可以使用。

常用的担体目数为多少？

答：常用的4-6mm内径的色谱柱：对于较长色谱柱，选用担体目数一般为40-80目；对于较短色谱柱选用担体目数一般为80-100目(每英寸内的筛孔数目为目）。

常用的担体怎样选择？

答：各种担体，名目繁多。在常用硅藻土担体中:
红色担体（如6210、201），可用于非极性或弱极性物质的分离。
白色担体（如101）可用于极性物质或碱性物质。
釉化红色担体（如301）可用于中等极性物质。
硅烷化白色担体可用于强极性氢键型物质如废水测定。
分离酸性物质，如酚类，要用酸洗处理的担体。
分离碱性物质，如乙醇胺，要用碱洗处理的担体。
微量分析要用硅烷化的担体。
有些特殊的情况下要用特殊的担体，如氟担体分离异氰酸酯类。
但是在普通的常量分析中，对担体可以不必过份讲究，甚至如耐火砖粉粒，玻璃珠砂和海沙也可以使用。

木有力气

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